Nghiên cứu được thực hiện nhằm phát triển quy trình duplex polymerase chain reaction (dPCR) phát hiện đồng thời hai tác nhân gây bệnh trên tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) do vi khuẩn Vibrio parahemolyticus và vi bào tử trùng Enterocytozoon hepatopenaei (EHP). Dựa trên sự tương đồng về nhiệt độ ủ mồi giữa hai chu trình PCR đơn phát hiện V. parahemolyticus và EHP để phát triển quy trình dPCR. Kết quả trình tự nucleotide của sản phẩm PCR từ hai tác nhân gây bệnh thể hiện sự tương đồng cao (từ 99,8 đến 100%) với các chủng V. parahemolyticus và EHP đã được tham chiếu trước đó trên ngân hàng gen. Quy trình dPCR có thể phát hiện đồng thời hai tác nhân gây bệnh (V. parahemolyticus và EHP) với các thành phần hoá chất tham gia phản ứng được tối ưu như sau: 10X PCR Buffer; 1U Taq ADN polymerase; 0,2 µM mồi EHP-510F; 0,2 µMmồi EHP-510R; 0,2 µM mồi VpPirB-392F; 0,2 µM mồi VpPirB-392R; chu trình nhiệt lần lượt là: 94^oC trong 5 phút, tiếp theo là 35 chu kỳ gồm 94^oC trong 30 giây, 60^oC trong 60 giây, và 72^oC trong 30 giây, và phần kéo dài cuối cùng ở 72^oC trong 10 giây. Quy trình dPCR phát hiện đồng EHP và V. parahemolyticus tại nồng độ ADN thấp nhất tương ứng là 20 ng/µL. Bên cạnh đó, hai cặp mồi sử dụng trong nghiên cứu này cũng cho kết quả đặc hiệu đối với V. parahemolyticus và EHP khi thực hiện phản ứng dPCR để phát hiện 7 tác nhân gây bệnh phổ biến khác trên động vật. Kết quả thí nghiệm cũng ghi nhận rằng quy trình dPCR đủ nhạy, đặc hiệu và được ứng dụng để phát hiện cùng lúc hai tác nhân gây bệnh phổ biến trên tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei).