Nghiên cứu này điều tra tính khả thi của việc sử dụng đậu đen (Phaseolus vulgaris) làm chất nền thay thế cho quá trình lên men natto để sản xuất nattokinase, một loại enzyme có hoạt tính tiêu sợi huyết đáng kể. Với những lo ngại về dị ứng liên quan đến natto từ đậu nành, đậu đen là một giải pháp thay thế tiềm năng ít gây dị ứng. Bốn chủng Bacillus sp. bản địa (CO18, MO39, TO46 và MS05) đã được đánh giá về khả năng sản xuất enzyme tiêu sợi huyết. Kết quả cho thấy Bacillus subtilis TO46 thể hiện hoạt tính enzyme cao nhất, với các điều kiện lên men tối ưu được xác định bằng Phương pháp đáp ứng bề mặt (RSM) và Thiết kế tổng hợp trung tâm (CCD). Các yếu tố chính như độ pH ban đầu, nồng độ pepton, mật độ vi khuẩn và thời gian lên men đã được tối ưu hóa để tăng cường sản xuất nattokinase. Trong điều kiện tối ưu, hoạt động nattokinase đáng chú ý là 418,32 FU/mL đã đạt được, vượt trội hơn so với natto truyền thống làm từ đậu nành. Những phát hiện cho thấy đậu đen là một chất nền thay thế đầy hứa hẹn cho quá trình lên men natto, mang lại lợi ích tiềm năng cho những người bị dị ứng đậu nành trong khi vẫn duy trì hoạt động tiêu sợi huyết cao.