Nghiên cứu được thực hiện nhằm phân lập và tuyển chọn các dòng Bacillus spp. sinh protease từ nước thải sản xuất bánh mì tại thành phố Cần Thơ; đồng thời, việc khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ và pH cũng đã được tiến hành. Kết quả phân lập được 18 dòng vi khuẩn, trong đó 16 dòng được xác định thuộc chi Bacillus dựa trên đặc điểm hình thái và sinh hóa. Tất cả các dòng đều có khả năng phân giải với đường kính từ 12,33 đến 17,10 mm và hoạt độ protease đạt 0,21 – 0,55 U/mL cao nhất ở dòng StNK1.1 là 0,55 U/mL và StCR3.3 là 0,52 U/mL. Nhiệt độ ảnh hưởng đến khả năng phân giải protein và hoạt tính protease, với giá trị cao nhất được ghi nhận trong khoảng 40 – 45°C. Dòng StCR3.3 đạt đường kính vòng phân giải (23,50 mm) và hoạt tính protease cao nhất (1,45 U/mL) tại 45°C. Hoạt tính enzyme giảm duy trì ở mức cao trong khoảng pH 6 – 8. Kết quả định danh bằng gen 16S rRNA xác định dòng StCR3.3 thuộc chi Bacillus, cho thấy tiềm năng ứng dụng trong sản xuất và xử lý nước thải giàu protein.