Natto ngày càng được sử dụng như một loại thực phẩm tăng cường sức khỏe để ngăn ngừa các bệnh huyết khối. Trước đây, natto chủ yếu được lên men từ đậu nành, điều này đặt ra một số hạn chế đối với những người bị dị ứng với đậu nành. Natto đậu đen (Phaseolus vulgaris) đã được tối ưu hóa về hoạt tính làm tan huyết khối để cung cấp một lựa chọn thay thế cho natto đậu nành. Các điều kiện lên men ảnh hưởng đến hoạt tính làm tan huyết khối của natto. Do đó, một kế hoạch thử nghiệm sử dụng ma trận sàng lọc Blackett-Burman và thiết kế tổng hợp trung tâm cho phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM-CCD) đã được thiết kế để tối ưu hóa hoạt tính làm tan huyết khối của natto đậu đen dựa trên các điều kiện lên men. Bốn yếu tố thực sự ảnh hưởng đến quá trình lên men trong số sáu yếu tố được nghiên cứu. Lên men với điểm tối ưu của bốn yếu tố này, bao gồm 2,8% peptone, mật độ vi khuẩn Bacillus subtilis 10⁴ CFU/100g, pH ban đầu là 5,5 và thời gian lên men là 33 giờ, cho hoạt tính enzyme nattokinase cao nhất là 198,02 FU/mL, cao hơn một số nghiên cứu về hoạt tính enzyme của natto đậu nành, và tương đương với hoạt tính enzyme trong natto đậu nành thương mại. Kết quả này cho thấy tiềm năng hoạt tính tan huyết khối của natto đậu đen, góp phần bảo vệ và cải thiện sức khỏe con người thông qua liệu pháp dinh dưỡng.