Nghiên cứu được thực hiện từ tháng 01/2022 – 12/2022 nhằm xây dựng phản ứng one-step multiplex (RT)-PCR chẩn đoán một số bệnh hô hấp do virus trên chó. Nghiên cứu đã thu thập 15 mẫu dịch ngoáy mũi từ những chó có triệu chứng nghi bị bệnh đường hô hấp như ho, chảy nước mắt, nước mũi tại thành phố Hồ Chí Minh và tỉnh Kiên Giang để tiến hành xét nghiệm chẩn đoán sự hiện diện của canine adenovirus type 2 (CAV-2), canine distemper virus (CDV) và canine parainfluenza virus (CPIV) bằng phản ứng one-step multiplex (RT)-PCR. Kết quả nghiên cứu đã thiết kế thành công các cặp mồi đặc hiệu chẩn đoán CAV-2, CDV và CPIV lần lượt là 135F/1366R, 132F/866R, 359F/1407R và hiệu chỉnh chu trình nhiệt cho phản ứng one-step multiplex (RT)-PCR. Kết quả khuếch đại từ phản ứng PCR đồng thời và phân biệt các trình tự gene của CAV-2, CDV và CPIV có kích thước lần lượt là 1.231, 734 và 1.048 bp. Số mẫu dương tính với CAV-2, CDV và CPIV lần lượt là 10/15, 11/15 và 13/15 mẫu xét nghiệm. Nghiên cứu đã thành công xây dựng phản ứng one-step multiplex (RT)-PCR nhằm góp phần chẩn đoán nhanh, chính xác và phân biệt các tác nhân virus gây bệnh hô hấp trên chó.