ABstract

A multiplex PCR protocol for stimultaneous detection of WSSV, HPV and b-actin endogenous gene of black tiger shrimp (Penaeus monodon) was developed and applied. DNA samples, which were WSSV positive detected by IQ2000 WSSV protocol, were used in OIE (2006) protocol to obtain step 1 PCR products of 1441 bp and step 1 PCR product of 941 bp. mPCR protocols to detect WSSV and b-actin with WSSV of DNA positive samples to obtain PCR products of 1441 bp (WSSV-step1), 941 bp (WSSV-step2) and 261 bp (b-actin) were developed. PCR protocol to detect HPV from Promjai (2002) was used to obtain PCR products of 441 bp. Then, mPCR protocol for stimultaneous detection of WSSV, HPV and b-actin was successfully developed. The obtainted testing results suggest these protocols can be used for detection of WSSV and HPV with reduced cost and is useful to control false negative result be using b-actin gene as internal control.

Keywords: PCR, mPCR, WSSV, HPV, Penaeus monodon, b-actin

Title: Multiplex PCR protocol for stimultaneous detection of white spot syndrome virus (WSSV) and hepatopancreatic parvovirus (HPV) in black tiger shrimp (Penaeus monodon)

TóM TắT

Qui trình mPCR (multiplex polymerase chain reaction) phát hiện đồng thời WSSV, HPV và gen b-actin của tôm sú (Penaeus monodon) được phát triển và ứng dụng. Sử dụng mẫu DNA dương tính với WSSV qua xét nghiệm bằng kit IQ2000 WSSV, qui trình PCR phát hiện WSSV (OIE, 2006) được thực hiện cho kết quả mẫu dương tính với WSSV hiện vạch ở vị trí 1441 bp (bước 1) và 941 bp (bước 2). Qui trình mPCR phát hiện đồng thời WSSV và ?-actin với mẫu DNA dương tính với WSSV được thực hiện cho kết quả hiện vạch ở vị trí 216 bp (là vạch thể hiện sự có mặt của ?-actin), vạch WSSV 1441 bp (bước 1) và vạch 941 bp (bước 2). Qui trình PCR phát hiện HPV (Promjai, 2002) được thực hiện cho kết quả mẫu dương tính hiện vạch ở vị trí 441 bp. Sau đó, qui trình mPCR phát hiện đồng thời WSSV, HPV và ?-actin được thực hiện. Kết quả cho thấy qui trình có khả năng ứng dụng tốt với việc sử dụng gen ?-actin làm nội chuẩn trong xét nghiệm vi-rút ở tôm bằng phương pháp PCR đồng thời giảm được chi phí xét nghiệm khi phát hiện đồng thời  WSSV và HPV.

Từ khóa: PCR, mPCR, WSSV, HPV, Penaeus monodon, b-actin