Abstract

The results of this study showed that  the crude enzyme extract  of Trun Quan (Pheretima posthum) was the most active on both casein and fibrin substrates in comparison with that of  Trun Ho, Trun Que, Trun Com and Trun Chi. Period of autolysis to get highest protease activity was 4 days. The optimum conditions for protease activity were 55^oC and pH 8 and 10. These enzymes were stable at 25-55^oC and at pH 7 and 11. The protease fractions were purified by acetone precipitation in combination with ionexchange  and hydrophobic chromatography. SDS-PAGE activity staining on casein substrate without beta-mercaptoethanol revealed that the enzyme composition of Trun Quan was complex. It composed of 10 protease fractions with molecular weight in a range from 24,0 to 58,3 kDa.

Keywords:  Trun Quan, Pheretima posthuma, protease, fibrin plate, ionexchange chromatography, hydrophobic chromatography, SDS-PAGE activity staining

Title:  Purification and characterization of proteases from earthworm (Pheretima posthuma)

TóM  TắT

Kết quả đề tài nghiên cứu cho thấy hoạt tính của protease từ dịch trích enzyme thô của trùn quắn  trên cả hai cơ chất casein va fibrin đều mạnh hơn so với trùn hổ, trùn quế, trùn cơm và trùn chỉ.  Thời gian thích hợp cho quá trình tự thủy phân để đạt hoạt tính protease cao nhất là 4 ngày.   Nhiệt độ tối ưu là 55^oC, và pH tối ưu là 8 và 10. Enzyme bền trong khoảng nhiệt độ 25-55^oC, ở  pH 7 và 11.

Tinh sạch bằng tủa acetone,  phối hợp với sắc ký trao đổi ion và tương tác kỵ nước, đồng thời phân tích điện di SDS-PAGE nhuộm hoạt tính không có beta-mercaptoethanol trên cơ chất casein cho thấy thành phần protease trong trùn quắn khá phức tạp, có đến 10 phân đoạn enzyme khác nhau với trọng lượng phân tử  từ 24,0 kDa đến 58,3 kDa.

Từ khóa: Trùn Quắn, Pheretima posthuma, protease, đĩa fibrin, sắc ký trao đổi ion, sắc ký tương tác kỵ nước, SDS-PAGE nhuộm hoạt tính